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2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

  • 型   號(hào):71711
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

2× Universal SYBR qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預(yù)混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。
2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

2 x Universal SYBR qPCR Mix

 

 2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

目錄號(hào):71711

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

71711-500

500 rxns (20 μl/rxn)

71711-2500

2500 rxns (20 μl/rxn)

2x Universal SYBR qPCR Mix

1 ml x5

1 ml x25

保存條件

-20℃保存,有效期 24 個(gè)月。使用前,充分融解,輕輕顛倒混勻,短期使用可放在 4 ℃,避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2× Universal SYBR qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預(yù)混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系,有效抑制非特異性擴(kuò)增,可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量,獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果,具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

預(yù)混液中含有通用型ROX,適用于所有qPCR儀,使用qPCR Mix時(shí)不需要額外添加ROX來(lái)校正儀器。

操作步驟:

1. 將DNA模板、引物、2 x Universal SYBR qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系:(以20μl反應(yīng)體系為例)

Components

Volume (20μl)

Final Concentration

2 x Universal SYBR qPCR Mix

10 μl

DNA Template

Variable

As required

Forward Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

RNase-free H2O

Up to 20 μl

Not applicable

注意:

1) 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系,cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%,基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋,以確定最佳的模板使用量。

2) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果,反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

3. qPCR反應(yīng)程序

 

注意:1) 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng),絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來(lái)說(shuō),二步法擴(kuò)增特異性高,三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度;如果因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。
2) 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;
3) 延伸(退火&延伸)時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整。
4) 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
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