對(duì)于大部分abcam抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20℃ or-80℃ 。對(duì)絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20℃是*足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處!
分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,zui少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃ 盡量不要超過1天。避免將abcam抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上。
關(guān)于abcam抗體加入一些試劑或其他溶劑的介紹。
關(guān)于加入甘油保存:
有些人會(huì)加50%的甘油到abcam抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20℃會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。但是abcam僅對(duì)非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩(wěn)定性;而Abcam只對(duì)按照推薦條件保存的抗體提供質(zhì)量保證!加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無菌操作,避免污染!
關(guān)于蛋白保護(hù)劑:
蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解(1mg/ml或者更高),這就是為什么在abcam抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
關(guān)于*(sodiumazide)的使用:
為了防止微生物污染,*經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02%(w/v))。很多abcam抗體已經(jīng)含有了0.02%-0.05%的*,在說明書的“Storage buffer”中有標(biāo)明的。
在下述情況中不能使用*:
如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究。*在抵抗微生物的同時(shí),對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的,因?yàn)樗钄嗔司€粒體的cytochromeelectron transport system。
要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:*會(huì)干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將*去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入*保存,但是濃度只能是0.01%。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal(merthiolate)可以替代*作為保護(hù)劑!
注意:*的去除方式,可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除!IgG的分子量是150kDa(IgM 是~ 600kDa); *的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除。
abcam抗體如何保存是有講究的,希望以上內(nèi)容可以給大家一些參考。